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細胞接收后的處理：
1）收到細胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
英文簡稱
規(guī)格
貨號
DAOY:DAOY
1×106
P-X700
產(chǎn)品詳情：
生長特性 貼壁細胞
細胞形態(tài) 上皮細胞樣
生長培養(yǎng)基 MEM（含NEAA）＋10% FBS＋1%P/S
凍存條件
凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
溫度：液氮
培養(yǎng)條件
氣相：空氣，95%；CO2，5%
溫度：37℃
推薦傳代比例 1:3-1:6
推薦換液頻率 2~3次/周
背景描述 The Daoy cell line was established in 1985 by P. F Jacobsen of the Royal Perth Hospital in Western Australia. The line was derived from biopsy material taken from a tumor in the posterior fossa of a 4 year old boy.
年齡（性別） 男；4歲
組織來源 結(jié)締組織增生性小腦髓母細胞
細胞類型 腫瘤細胞
腫瘤類型 神經(jīng)母細胞瘤細胞
生物等級 1
倍增時間 33.6 hours, at 48th passage (PubMed=2993532); 34 hours (ATCC)
致瘤性 Yes, in nude mice(The cells form serially transplantable intercranial and subcutaneous tumors.)
保藏機構(gòu) ATCC; HTB-186 BCRJ; 0325
干冰運輸及復(fù)蘇好存活細胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
1）準備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細胞處理：
1）凍存細胞的復(fù)蘇：：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3）細胞凍存:收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面T25瓶為例：
1、細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實驗原理：
公司正在出售的產(chǎn)品：
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磷酸葡萄糖酸內(nèi)酯酶抗體 |
凋亡加強結(jié)構(gòu)域蛋白14抗體 CARD14 |
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PGLS |
痛覺調(diào)節(jié)肽NPFF抗體 NPFF |
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源盒蛋白C6抗體 |
血小板糖蛋白GPIb（CD42b）重組兔單克隆抗體 GP1BA |
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HOXC6 |
嗅覺受體5W2抗體 OR5W2 |
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膜粘連蛋白7抗體 Annexin A7 |
多肽N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶11抗體 GALNT11 |
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Fas相關(guān)1因子抗體 FAF1 |
間隙連接蛋白47抗體 GJC2 |
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FITC標記人CD49d單克隆抗體 human CD49d/FITC |
21號染色體開放閱讀框24抗體 NCRNA00114 |
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甲基化組蛋白H3(di methyl K9)單克隆抗體 Histone H3(di methyl K9) |
4-羥基苯丙酮酸氧化酶抗體 4HPPD |
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冰凍切片組織ER BETA 蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒 |
髓系細胞觸發(fā)受體1抗體 TREM1 |
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血液RNA提取試劑盒 50次 |
天冬氨酰tRNA連接酶抗體 NARS |
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細胞亮（leucine）含量比色法定量檢測試劑盒 |
PTRHD1蛋白抗體 PTRHD1 |
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小鼠半乳凝素2(GAL2)elisa檢測試劑盒 |
S100A8+A9 Complex單克隆抗體 S100A8+A9 Complex |
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人Wnt-3a蛋白(WNT3A)elisa分析檢測試劑盒 |
小鼠碳酸酐酶1(CA-1)elisa檢測試劑盒 |
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組織糖原磷酸化酶a（GLYCOGEN PHOSPHORYLASE）活性 |
DAOY人髓母細胞瘤細胞大鼠降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)elisa檢測試劑盒 |
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大鼠Ⅱ型膠原C端肽(CTX-Ⅱ)elisa檢測試劑盒 |
RIPA 裂解液 （不含triton x-100）100ml |
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小鼠甲狀腺過氧化物酶(TPO)elisa檢測試劑盒 |
細胞氧化型甘肽（GSSG）濃度高效液相色譜定量檢測試劑盒 |
實驗步驟：
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上，利用293T細胞進行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉(zhuǎn)染前24 h進行細胞鋪板，轉(zhuǎn)染時細胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系。