操作流程：
（1）待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設3個平行孔；設兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細胞裂解液100μl；另設一個空白對照孔，加入純細胞裂解液100μl。 
（2）酶標板置4℃，包被過夜。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
（4）陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。 
（5）酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（6）洗板，同（4）。 
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 
（8）酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（9）洗板，同（4）。 
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應15-20min。 
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應。 
（12）分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，終測得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標本（S）和陰性對照（N）的 OD值后，計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。

我司主營產(chǎn)品之一，產(chǎn)品皆嚴格按照相關標準進行生產(chǎn)，并經(jīng)過了嚴格地反復地檢測，我們以嚴謹?shù)膽B(tài)度保證產(chǎn)品的質(zhì)量，從而保證您的實驗順利進行。產(chǎn)品供貨周期短，供貨及時，且我司還提供完整的售前和售后服務。本公司產(chǎn)品僅用于科研。

試劑配制:

1、酶聯(lián)板assay plate ：一塊96孔或者48孔。
2、標準品standard：2瓶凍干品。
3、樣品稀釋液sample diluent：1×20ml/瓶。
4、生物素標記抗體稀釋液biotin-antibody diluent：1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 hrp-avidin diluent：1×10ml/瓶。
6、生物素標記抗體biotin-antibody：1×120μl/瓶1：100
7、辣根過氧化物酶標記親和素hrp-avidin：1×120μl/瓶1：100
8、底物溶液tmb e：1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液wash buffer：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液stop solution：1×10ml/瓶2n h2so4。

試劑準備：
1. 使用前將所有的試劑和標本緩慢均衡至室溫(18-25oC)，試劑不能直接在37oC溶解。
2. 標準品(凍干品)：每瓶標準品加入標準品稀釋液1mL，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為2000pg/mL。準備7個稀釋標準品的EP管，每個EP管中加入150μL的標準品稀釋液，如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度， 標準品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。
3. 濃洗滌液：用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL，進行30倍稀釋。

樣本實驗前準備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
（2）血漿：
應根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
（3）尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
（4）細胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。
（5）培養(yǎng)細胞
檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
（6）組織標本
切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

注意事項：

1. 試劑盒應在有效期內(nèi)使用，請不要使用過期的試劑。
2. 試劑盒未使用時應保存在 2-8℃冰箱，已復溶但未用完的標準品，請丟棄。
3. 試劑盒使用前請在室溫恢復 30 min，且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
4. 在試驗中標準品和樣本建議作復孔檢測，且加入試劑的順序應保持一致。
5. 為避免交叉污染，請在試驗中使用 1 次性試管，槍頭，封板膜及潔凈塑料容器。
6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結合物的體積較少，在運輸過程中微量液體會沾到管壁及瓶蓋上，使用前請離心處理（5-10 S 即可），使管壁上的液體集中在管底部，取用時，請用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外，請不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個組分。
8. 為保證結果準確，每次檢測均需做標準曲線。
1,3,5-三氯0.996 250mg

硬脂酸(C18:0)0.987 250mg

鄰二0.998 250mg

三(2,4-二叔丁基)酯0.999 250mg

3-硝基甲0.993 250mg

二甲基黃0.96 250mg

磺胺氯噠嗪0.99 250mg

惡喹酸0.98 250mg

卡那霉素硫酸鹽0.979 100mg

鄰二酐(酐)0.999 250mg

鄰二二乙酯 -D40.98 5mg磷酸化踝蛋白抗體

CD134抗體

腫瘤壞死因子-α/TNFα抗體

血小板反應蛋白抗體

Toll樣受體11抗體

Toll樣受體6抗體

髓系細胞觸發(fā)受體2抗體

Toll樣受體9抗體

髓系細胞觸發(fā)受體樣轉(zhuǎn)錄因子1抗體

髓系細胞觸發(fā)受體樣轉(zhuǎn)錄因子2抗體

血小板反應蛋白2/凝血酶敏感蛋白2抗體

端粒酶相關蛋白2/端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶抗體

血栓素A2受體抗體

人17-α-羥化酶(S17αH)免費代測ELISA Kitphospho-NDEL1(Thr219)  磷酸化中心粒蛋白Nudel抗體 0.1ml

轉(zhuǎn)錄因子20(TCF20)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Transcription factor 20 (TCF20)    規(guī)格：48T/96T 進口、國產(chǎn)

RPL11/GIG34  細胞生長抑制蛋白34 0.2ml

血小板內(nèi)皮細胞粘附分子1(PECAM1)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Platelet/Endothelial Cell Adhesion Molecule (PECAM1)    規(guī)格：48T/96T 進口、國產(chǎn)

CDK9/Cyclin T1  周期素依賴性激酶9抗體 0.1ml

補體因子B(CFB)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Complement Factor B (CFB)    規(guī)格：48T/96T 進口、國產(chǎn)

DBF4B/ASKL1  S期激酶活化蛋白DBF4B抗體 0.2ml

組織因子(TF)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Tissue Factor (TF)    規(guī)格：48T/96T 進口、國產(chǎn)

Cytochrome c oxidase subunit 2  細胞色素c氧化酶亞型2抗體 0.1ml

P選擇素(SELP)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Selectin, Platelet (SELP)    規(guī)格：48T/96T 進口、國產(chǎn)

BAG5  BCL2分子伴侶調(diào)節(jié)蛋白5抗體 0.2ml

緩激肽(BK)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Bradykinin (BK)    規(guī)格：48T/96T 進口、國產(chǎn)